Методические указания к выполнению самостоятельной работы icon

Методические указания к выполнению самостоятельной работы



НазваниеМетодические указания к выполнению самостоятельной работы
Дата конвертации21.11.2012
Размер67.85 Kb.
ТипМетодические указания

Э.Г. Кравцов, Е.Г. Волина




МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ


К ПОСТАНОВКЕ РЕАКЦИИ РОЗЕТКООБРАЗОВАНИЯ (Е-РОК)

ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ Т-ЛИМФОЦИТОВ

В ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ЛЮДЕЙ

(подготовлены на кафедре микробиологии)


Для студентов, аспирантов и преподавателей

медицинского и аграрного факультетов


Москва


2006

Тема: Оценка количества Т-лимфоцитов в периферической крови человека с использованием метода спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана (Е-РОК).

^ Цель занятия: Знать методику постановки реакции розеткообразования с эритроцитами барана (Е-РОК) для количественного учета Т-лимфоцитов периферической крови людей.

Основные вопросы:

  1. Функции Т и В- лимфоцитов.

  2. Реакции розеткообразования - как способ определения рецепторного аппарата Т и В- лимфоцитов.

  3. Патологические состояния, связанные с нарушениями Т и В системы иммунитета.

  4. Принципы реакции розеткообразования, ее учет и оценка результатов.



^

Самостоятельная работа:





  1. Зарисовать результаты реакции розеткообразования, отметить основные типы розеток.

  2. Подсчитать в препарате число Е-РОК (розеткообразующих с эритроцитами барана клеток). Определить % лимфоцитов, образующих розетки.

  3. Оценить, руководствуясь нормальными показателями, состояние иммунной системы обследуемого пациента.


^ Методические указания к выполнению самостоятельной работы


Задание 1. Ознакомиться с принципом реакции спонтанного розеткообразозания с эритроцитами барана (Е-РОК) и знать область ее применения.

Важная роль в деятельности иммунной система принадлежит иммунокомпетентным клеткам.

Т-лимфоциты обеспечивают клеточные формы иммунного ответа, В- лимфоциты отвечают за активность гуморального иммунитета.

Определение уровней Т и В лимфоцитов входит в комплекс тестов, используемых для оценки иммунного статуса организма.

Изменение числа Т или В лимфоцитов может быть связано с угнетением или стимуляцией их образования в центральных органах иммунной системы (тимус, костный мозг), с нарушением их дифференцировки, изменением количественного соотношения отдельных субпопуляций и т.д.
Для понимания регуляторных механизмов иммунитета и возникающей иммунопатологии следует рассмотреть основные этапы развития иммуноцитов. На рисунке 1 представлена схема лимфоидного звена гемопоэза.

При поражении системы на уровне гемопоэтической клетки нарушается весь процесс кроветворения. Блокирование образования лимфоидных стволовых клеток приводит к тому, что в периферической крови уменьшается количество всех лимфоцитов и соответственно снижается уровень Ig- глобулина в сыворотке.

Уменьшение или отсутствие в периферической крови Т-лимфоцитов при нормальном содержании В - лимфоцитов происходит по нескольким причинам:

  1. Не образуются предшественники Т - клеток из лимфоидных стволовых клеток.

  2. Отсутствует химический гуморальный фактор, обеспечивающий созревание Т - лимфоцитов, т.е. поражены эпителиальные клетки тимуса.

  3. Блокировано образование одной или нескольких субпопуляций Т-лимфоцитов.

Аналогичные изменения наблюдаются и при образовании В - лимфоцитов.

Указанные сдвиги могут быть выражены в разной степени, что может проявляться как регуляторная реакция, а при глубоких нарушениях - как патологический процесс. Поэтому контроль за популяционным составом лимфоцитов имеет большое значение в оценке иммунного статуса организма.


Рис. 1. Схема лимфоидного звена гемопоэза.





HSC - гемопоэтическая стволовая клетка

LSC - лимфоидная стволовая клетка
^

РТС - предшественник Т-клеток


ТЕС - эпителиальная клетка тимуса

тнF - тимический гуморальный фактор

ТH - хелпер

ТE - эффектор

ТS - супрессор

РВС - предшественник В- клеток

B - лимфоцит

B
плазмоциты, продуцирующие

соответствующие иммуноглобулины
M

Bg

BA

Реакция розеткообразования является наиболее простым ориентировочным методом для определения количества Т и В лимфоцитов в общем пуле иммунокомпетентных клеток. Метод основан на способности Т-лимфоцитов человека взаимодействовать с эритроцитами барана, образовывая при этом структуры, напоминающие "розетки". Аналогичным образом В - лимфоциты взаимодействуют с эритроцитами мши. Постановка реакции с двумя видами эритроцитов позволяет определить число Т и В лимфоцитов в общем пуле иммунокомпетентных клеток. У здоровых людей Т-лимфоциты составляют 40-70%, а В - лимфоциты - 15-35% от общего числа лимфоцитов. Кроме клеток, образующих розетки, в периферической крови присутствуют лимфоциты, не взаимодействующие ни с одним из видов эритроцитов - это, так называемые, нулевые лимфоциты, т.е. недифференцированные клетки, количество которых в периферической крови не превышает 5-10% от общего количества всех лимфоцитов.

Поверхностные рецепторы у различных субпопуляций лимфоцитов имеют различную плотность, поэтому образуемые с ними розетки могут выглядеть по-разному. На одних лимфоцитах возможна фиксация 2-3 эритроцитов, на других - более трех. Иногда на одном лимфоците фиксируется так много эритроцитов, что их трудно сосчитать. В этом случае розетка имеет вид "Морулы".

Задание 2. Изучить принцип постановки реакции спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана (Е-POK).

Лимфоциты, полученные из крови человека, смешивают с эритроцитами барана в соотношении 1:10, центрифугируют и выдерживают 1 час при +4°С.

Затем из этой смеси делают мазок, фиксируют спиртом и окрашивают метиленовым синим.

Микроскопируют с использованием иммерсионной системы при увеличении х900.

В препарате подсчитывают число свободных лимфоцитов и количество лимфоцитов, образовавших розетки. Лимфоцит от других форменных элементов крови отличается размером (=10 мкм), правильной округлой формой, плотным ядром строго округлой формы, окруженным тонким, почти незаметным ободком цитоплазмы. За "розетку" считают лимфоцит, к которому прикрепилось не менее 2 эритроцитов. В тетрадь зарисовывают микроскопическую картину реакции. Результаты подсчета лимфоцитов вносят в таблицу 1.


Таблица 1.
^

Количество Е-РОК у пациента


№ мазка

Число лейкоцитов

Число E-POK

% E-POK от общего числа лейкоцитов

1

2

3












Полученные значения Е-РОК сравнивают с данными уровня Т-лимфоцитов здоровых людей соответствующей возрастной группы (табл.2.).


Таблица 2.
^

Уровень Т-лимфоцитов у здоровых людей





Возрастная группа

(лет)

Уровень Т-лимфоцитов

в %

7-10

20-30

31-40

41-60

70-90

72±8

65±4

63±5

68±8

55±4


Делается предварительное заключение о состоянии Т-системы иммунитета у пациента.


Контрольные вопросы по теме:


  1. Перечислите иммунокомпетентные клетки и укажите их функцию.

  2. По каким причинам происходит изменение количества Т-лимфоцитов в периферической крови.

  3. Для какой цели применяется реакция спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана (Е-РОК).

  4. Объясните принцип постановки реакции розеткообразования с эритроцитами барана (Е-РОК).

  5. Какое количество Т-, В- и недифференцированных лимфоцитов содержится в периферической крови здоровых людей.



^

Тестовый контроль



1. Методом количественной оценки Т-лимфоцитов периферической крови человека является реакция:
A) фагоцитоза;

Б) связывания комплемента;

В) спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана (Е-РОК);

Г) розеткообразования с эритроцитами мыши;

Д) розеткообразования с эритроцитами, обработанными антителами и комплементом (ЕAC-PОK).

2. Реакция розеткообразования с эритроцитами барана (Е-РОК) считается положительной, если на 1 лимфоците адсорбируется:

A) один эритроцит барана;

Б) С3 фракция комплемента;

B) более 3-х эритроцитов барана;
Г) антиген бактерии.

3. У здорового человека в периферической крови количество Т-лимфоцитов составляет:

A) 5-10%;
Б) 40-70%;

B)15-35%.

4. При смешивании эритроцитов барана с лимфоцитами периферической крови человека образуются "Е-розетки" только с теми клетками, которые являются:

A) В – лимфоцитами;

Б) недифференцированными лимфоцитами;

B) Т- лимфоцитами

5. При смешивании эритроцитов мыши с лимфоцитами периферической крови человека образуются “Е-розетки” с теми клетками, которые являются:

А) В- лимфоцитами;

Б) недифференцированными лимфоцитами;

В) Т- лимфоцитами.

Ответы на тестовые вопросы


1 – В; 2 – В; 3 – Б; 4 – В; 5 – А.




Похожие:

Методические указания к выполнению самостоятельной работы iconМетодические указания к выполнению курсовой работы для студентов специальности 100110. 65 «Домоведение»
Экономика домашнего хозяйства и окружающего социума: методические указания к выполнению курсовой работы / сост.: к филос н., доцент...
Методические указания к выполнению самостоятельной работы iconМетодические указания по подготовке, выполнению, оформлению и защите дипломной работы, по ее рецензи­рованию
Методические указания по выполнению дипломных работ для студен­тов специальности "Мировая экономика" / Сост. Л. В. Левченко. Самара:...
Методические указания к выполнению самостоятельной работы iconМетодические указания для самостоятельной работы студентов по курсу
Методические указания для самостоятельной работы по курсу «Бухгалтерский финансовый учет» тема «Учет операций по налогообложению...
Методические указания к выполнению самостоятельной работы iconМетодические указания к выполнению самостоятельной работы
Знать правила взятия и транспортировки в лабораторию исследуемого материала, схемы микробиологического исследования при менингококковой...
Методические указания к выполнению самостоятельной работы iconМетодические указания к выполнению курсовой работы по дисциплине "Прикладная математика"/Сост.: Колемаев В. А., Карандаев И. С. и др. Гуу, М.: 2000
Методические указания к выполнению курсовой работы по дисциплине ”Прикладная математика”/Сост.: Колемаев В. А., Карандаев И. С. и...
Методические указания к выполнению самостоятельной работы iconДокументы
1. /ЗАТУХАЮЩИЕ ЭЛЕКТРОМАГНИТНЫЕ КОЛЕБАНИЯ Методические указания по выполнению лабораторной...
Методические указания к выполнению самостоятельной работы iconМетодические указания к лабораторным работам для студентов всех форм обучения
К выполнению лабораторных работ допускаются студенты прошедшие инструктаж по технике безопасности. Прежде чем приступить к выполнению...
Методические указания к выполнению самостоятельной работы iconМетодические указания для выполнения контрольной работы по криминологии
«Юриспруденция» предусмотрено написание студентами одной контрольной работы по криминологии. Контрольная работа является частью самостоятельной...
Методические указания к выполнению самостоятельной работы iconМетодические указания по подготовке курсовых работ Москва 2002 утверждено
Методические указания подготовлены для студентов, обучающихся по специальности 350 800 "Документоведение и документационное обеспечение...
Методические указания к выполнению самостоятельной работы iconМетодические указания к практическим занятиям и самостоятель­ной работе утверждены и рекомендованы к изданию кафедрой психо­логии и социального управления, протокол от 5 мая 2003 г. №6
Семьеведение: Методические указания к практическим занятиям и самостоятельной работе / Сост канд филос наук, доцент Т. В. Поп­кова,...
Разместите кнопку на своём сайте:
Документы


База данных защищена авторским правом ©podelise.ru 2000-2014
При копировании материала обязательно указание активной ссылки открытой для индексации.
обратиться к администрации
Документы

Разработка сайта — Веб студия Адаманов